Un microscopio de fluorescencia é un tipo de microscopio óptico que utiliza unha fonte de luz de alta intensidade para iluminar a mostra e excitar os fluorocromos da mostra. A iluminación do exemplar adoita facerse cunha fonte de luz que emite luz ultravioleta. Son amplamente utilizados en campos biolóxicos, médicos e industriais.
Como funciona un microscopio de fluorescencia?
Un microscopio de fluorescencia utiliza unha lámpada de mercurio ou xenón para producir luz ultravioleta. A luz entra no microscopio e incide nun espello dicroico, un espello que reflicte un rango de lonxitudes de onda e permite que pase outro rango. O espello dicroico reflicte a luz ultravioleta ata o exemplar. Algúns exemplares fluorescen naturalmente baixo a luz ultravioleta porque conteñen substancias fluorescentes como a clorofila. Se a mostra que se vai ver non ten fluorescencia natural, pódese tinguir con colorantes fluorescentes chamados fluorocromos.
En que consiste un microscopio de fluorescencia?
1. Fonte de luz
As fontes de luz máis comúns son o mercurio, o xenón e os LED. Mercurio proporciona a mellor calidade de luz para o microscopio de fluorescencia. Os LED son cada vez máis populares porque son menos caros que outras fontes e consomen menos enerxía.
| Lámpada de mercurio | Lámpada de xenón | LED | |
| Lonxitude de onda da luz emitida | 350-370 nm | 400 nm ~ 450 nm | 400-700 nm |
| Vida útil (hora) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| Vantaxe | 1. Luz de alta intensidade, as fontes de luz máis comúns. 2. Emite ultravioleta e azul-violeta fortes para excitar todo tipo de fluoróforos. 3. Imaxes brillantes e coloridas. | 1. A intensidade espectral é estable. 2. Forte intensidade espectral no infravermello e no infravermello medio. | 1. Fácil de substituír. 2. Non é necesario quentar. 3. Pódese acender e apagar ao instante. 4. Controla a intensidade da fonte de luz. |
| Desvantaxe | 1. Unha vida curta. 2. Tempo de quecemento longo. | 1. Requírese unha caixa de alimentación DC de baixa tensión especial para o exceso de calor. 2. Máis caro que a lámpada de mercurio | 1. A luz UV é máis débil que a lámpada de mercurio. 2.Cada lonxitude de onda da luz require un LED separado debido aos estreitos anchos de banda que emiten. |
Accesorio fluorescente de mercurio
Accesorio fluorescente LED
2. Filtro de excitación
O filtro de excitación é esencial para o funcionamento dun microscopio de fluorescencia. Pasa a luz dunha lonxitude de onda máis curta, que o colorante fluorescente podería absorber. Ademais, bloquea as outras fontes de luz excitante.
Filtro de excitación (B,G,U,V)
3. Espello dicroico
O espello dicroico é un tipo de filtro óptico que reflicte a luz a determinadas lonxitudes de onda mentres transmite outras. Utilízase nos microscopios de fluorescencia para separar as lonxitudes de onda de excitación e emisión.
4. Filtro de emisións
O filtro de emisión pasa só polas lonxitudes de onda emitidas polo fluoróforo e bloquea toda a luz non desexada fóra desta banda, especialmente as lonxitudes de onda de excitación.
5. Colorantes fluorescentes
Os colorantes fluorescentes son compostos orgánicos que posúen unha propiedade de fluorescencia, pola cal poden formar unha imaxe fluorescente ao emitir luz verde visible de alto contraste despois de ser excitados pola luz ultravioleta altamente iluminadora. Os colorantes fluorescentes de uso común son: DAPI (49,6-diamidino-2-fenilindol), laranxa de acridina, auramina-rodamina, Alexa Fluors ou DyLight 488.
Cantos tipos de microscopios de fluorescencia?
1. Microscopio de epifluorescencia vertical:
É o tipo máis común de microscopio de fluorescencia. A excitación do fluoróforo e a detección da fluorescencia realízanse pola mesma vía luminosa (é dicir, a través do obxectivo). A maioría dos microscopios de fluorescencia, especialmente os utilizados nas ciencias da vida, son de deseño de epifluorescencia.
Microscopio biolóxico fluorescente de investigación BS-2081F
2. Microscopio de fluorescencia confocal:
Microscopio de fluorescencia confocal: este tipo de microscopio de fluorescencia combina a exploración con láser con iluminación fluorescente para producir unha imaxe. Pódese usar nunha ampla gama de aplicacións, como estudar células e tecidos, detectar proteínas e outras substancias dentro das células e medir o grosor de materiais.
Microscopio biolóxico fluorescente de investigación BS-2081F
3. Microscopio de fluorescencia invertida
A fonte de luz e o condensador deste tipo de microscopio están situados na parte superior, mirando cara abaixo. O ángulo de iluminación debe ser de 90 graos con respecto á superficie da mostra que se está a examinar.
Microscopio fluorescente invertido BS-2095F
Cales son as vantaxes e inconvenientes dos microscopios de fluorescencia?
Vantaxes:
- Permite a observación das células dos seres vivos sen danalos
- Ofrece imaxes de alta resolución con cores precisas
- Permite o estudo de procesos vivos nas células
- Ser utilizado para identificar diferentes tipos de moléculas no interior das células, como proteínas ou ácidos nucleicos.
Desvantaxes:
-Só permite a observación de estruturas específicas dentro dunha célula marcada co colorante fluorescente.
-O fotobranqueamento debido á excitación electrónica durante o proceso de fluorescencia pode afectar ás moléculas reactivas dos colorantes fluorescentes. Como resultado, os colorantes reactivos poden perder a súa propiedade química de intensidade de emisión de fluorescencia.
-As células son susceptibles ao efecto fototóxico despois da tinción con colorantes fluorescentes, xa que as moléculas do fluoróforo absorben os fotóns de alta enerxía da luz de lonxitude de onda curta.
Cales son as aplicacións dun microscopio de fluorescencia?
Os microscopios de fluorescencia úsanse amplamente en diversos campos de investigación e aplicación, incluíndo bioquímica, bioloxía celular, microbioloxía, inmunoloxía e medicina.
1. No campo da bioloxía, o microscopio de fluorescencia permite a identificación precisa e detallada de compoñentes e actividades celulares celulares e submicroscópicas coa axuda do etiquetado con colorantes fluorescentes.
2. No ámbito médico, o microscopio de fluorescencia pode usar reactivos fluorescentes para detectar a presenza e distribución de bacterias e virus, ou para axudar a marcar obxectivos cirúrxicos para facilitar a cirurxía.
3. No campo da mineraloxía, o microscopio de fluorescencia utilízase a miúdo para estudar substancias con propiedades de fluorescencia espontánea, como o asfalto, o petróleo, o carbón, o óxido de grafeno e outros minerais.
4. Na ciencia de materiais, o microscopio de fluorescencia pódese utilizar na industria téxtil ou na industria do papel para analizar materiais a base de fibras.
Hora de publicación: 14-mar-2023