A microscopía de fluorescencia revolucionou a nosa capacidade para visualizar e estudar especímenes biolóxicos, permitíndonos afondar no intrincado mundo das células e moléculas. Un compoñente clave da microscopia de fluorescencia é a fonte de luz utilizada para excitar moléculas fluorescentes dentro da mostra. Ao longo dos anos utilizáronse diversas fontes de luz, cada unha coas súas características e vantaxes únicas.
1. Lámpada de mercurio
A lámpada de mercurio de alta presión, que vai de 50 a 200 watts, está construída con vidro de cuarzo e ten forma esférica. Contén unha certa cantidade de mercurio no seu interior. Cando funciona, prodúcese unha descarga entre dous electrodos, facendo que o mercurio se evapore e a presión interna na esfera aumenta rapidamente. Este proceso adoita levar entre 5 e 15 minutos.
A emisión da lámpada de mercurio de alta presión resulta da desintegración e redución das moléculas de mercurio durante a descarga do electrodo, o que leva á emisión de fotóns de luz.
Emite unha forte luz ultravioleta e azul-violeta, polo que é adecuada para excitar diversos materiais fluorescentes, polo que se usa amplamente na microscopía de fluorescencia.
2. Lámpadas de xenón
Outra fonte de luz branca de uso común na microscopia de fluorescencia é a lámpada de xenón. As lámpadas de xenón, como as de mercurio, proporcionan un amplo espectro de lonxitudes de onda desde o ultravioleta ata o infravermello próximo. Non obstante, difiren nos seus espectros de excitación.
As lámpadas de mercurio concentran a súa emisión nas rexións case ultravioleta, azul e verde, o que garante a xeración de sinais fluorescentes brillantes pero presenta unha forte fototoxicidade. En consecuencia, as lámpadas HBO adoitan reservarse para mostras fixas ou imaxes de fluorescencia débil. Pola contra, as fontes de lámpadas de xenón teñen un perfil de excitación máis suave, o que permite comparar a intensidade a diferentes lonxitudes de onda. Esta característica é vantaxosa para aplicacións como medidas de concentración de ións calcio. As lámpadas de xenón tamén exhiben unha forte excitación no intervalo do infravermello próximo, especialmente ao redor de 800-1000 nm.
As lámpadas XBO teñen as seguintes vantaxes sobre as lámpadas HBO:
① Intensidade espectral máis uniforme
② Intensidade espectral máis forte nas rexións do infravermello e do infravermello medio
③ Maior saída de enerxía, facilitando o acceso á apertura do obxectivo.
3. LEDs
Nos últimos anos, xurdiu un novo competidor no ámbito das fontes de luz de microscopía de fluorescencia: os LED. Os LED ofrecen a vantaxe de acenderse e apagar rapidamente en milisegundos, reducindo os tempos de exposición das mostras e prolongando a vida útil das mostras delicadas. Ademais, a luz LED presenta un decaemento rápido e preciso, diminuíndo significativamente a fototoxicidade durante experimentos de células vivas a longo prazo.
En comparación coas fontes de luz branca, os LED normalmente emiten dentro dun espectro de excitación máis estreito. Non obstante, hai dispoñibles varias bandas de LED, o que permite aplicacións versátiles de fluorescencia multicolor, o que fai que os LED sexan unha opción cada vez máis popular nas configuracións modernas de microscopía de fluorescencia.
4. Fonte de luz láser
As fontes de luz láser son altamente monocromáticas e direccionais, polo que son idóneas para a microscopía de alta resolución, incluíndo técnicas de súper resolución como STED (Stimulated Emission Depletion) e PALM (Photoactivated Localization Microscopy). A luz láser adoita seleccionarse para que coincida coa lonxitude de onda de excitación específica requirida para o fluoróforo obxectivo, proporcionando unha alta selectividade e precisión na excitación de fluorescencia.
A elección dunha fonte de luz de microscopio de fluorescencia depende dos requisitos experimentais específicos e das características da mostra. Non dubide en contactar connosco se precisa algunha axuda
Hora de publicación: 13-09-2023